تولید لنتیویروسهای نوترکیب بیان کننده mir-۱۶ توسط ترانسفکشن موقت سلولهای ۲۹۳t
نویسندگان
چکیده
هدف از این مطالعه تولید لنتیویروسهای بیان کننده mir-16 است. پس از ترانسداکشن، تغییرات ایجاد شده در سطوح بیانی این mirna و پروتئین هدف آن ارزیابی خواهد شد. مواد و روشها: قطعه ژنی حاوی توالی پیشساز mir-16 در پلاسمید لنتی ویروسی کلون شد. سازه نوترکیب همراه با پلاسمیدهای کد کننده پروتئینهای ساختاری و پوششی ویروس توسط کلسیم-فسفات به رده سلولی 293t ترانسفکت شد. سوپ سلولی جمعآوری و ذرات ویروسی توسط اولتراسانترفیوژ رسوب داده شد و تعیین تیتر ویروس توسط میکروسکوپ فلورسانت و روش فلوسایتومتری انجام یافت. تغییرات در سطوح بیانی mir-16 و پروتئین هدف آن بهترتیب توسط روشهای real-time pcr و لکهگذاری وسترن ارزیابی شد. نتایج: تأیید حضور ژن در پلاسمید و درستی توالی آن توسط کلونی-pcr، هضم آنزیمی کلونهای مثبت و توالییابی انجام شد. پس از ترانسفکشن همزمان سلولهای 293t با پلاسمید لنتی-mir و پلاسمیدهای ساختاری و پوششی ویروس و تعیین تیتر ذرات ویروسی تغلیظ شده، سلولهای مورد نظر با لنتیویروس نوترکیب آلوده شدند. بیشینه بیان gfp در بیش از 80 درصد سلولهای آلوده شده با لنتیویروس در moi=1 حاصل شد. بررسی سطوح بیانی mir-16 توسط real-time pcr نشان داد که بیان این میکرو rna در سلولهای آلوده شده با لنتیویروس واجد mir-16 در مقایسه با گروه کنترل افزایش محسوسی دارد. تجزیه و تحلیل لکهگذاری وسترن نیز نشان داد بیش بیان mir-16 سبب کاهش بیان پروتئین bcl-2 میشود. نتیجهگیری: سیستم بیانی لنتیویروسی ارایه شده میتواند بهعنوان ابزاری در راستای تحویلرسانی مؤثر مقلدهای میکرو rna به سلول پیشنهاد شود
منابع مشابه
تولید لنتی ویروس های نوترکیب توسط ترانسفکشن موقت سلول های 293t
دیابت نوع 1 یک بیماری خودایمنی است که میلیونها نفر از مردم دنیا به آن مبتلا هستند، دلیل اصلی این بیماری تخریب خودایمن سلول های مولد انسولین در پانکراس است.pdx–1به عنوان یک فاکتور رونویسی هومئودمین، مهمترین فاکتور ژنتیکی در تکوین پانکراس و رونویسی ژن انسولین است. یکی از روش های درمانی موثر برای بیماری دیابت نوع 1، ژن درمانی توسط وکتورهای ویروسی می باشد.هدف از این مطالعه تولید لنتی ویروس نوترکیب ...
15 صفحه اولتولید انگلهای نوترکیب لیشمانیا تروپیکا بیان کننده دو پروتئین گزارشگرEGFP و لوسیفراز
سابقه و هدف: انگل لیشمانیا تروپیکا عامل بروز لیشمانیوز پوستی و احشایی در ایران است. بعلت فقدان یک آزمون دقیق، حساس و غیرتهاجمی در مدل حیوانی، درمان و واکسیناسیون برعلیه آن با چالش بزرگی همراه است. لذا در این مطالعه، لیشمانیا تروپیکا با دو ژن گزارشگر پروتئین فلورسنت سبز (egfp) و لوسیفراز (luc) به شکل اتصال یافته (egfp-luc) ترانسفکت شد تا در مطالعات آتی بعنوان یک ابزار تشخیصی سریع و دقیق برای ردی...
متن کاملطراحی و ساخت سازه ژنی نوترکیب بیان کننده ژن حفاظت کننده سلولی
Background : Genetic manipulation is an effective strategy to protect cells against environmental damages and enhance their capabilities for therapeutic usage. In order to avoid unwanted side effects, such as cancers, the expression of genes should be temporary increased. The aim of this study was to clone and temporary increased expression of a cell protective gene, Metallothionein 1 (MT1) in ...
متن کاملمقایسه تحریک تولید سیتوکین های التهابی به وسیله شیگا توکسین نوترکیب و سویه استاندارد تولید کننده شیگا توکسین نوترکیب و سویه استاندارد تولید کننده شیگا توکسین
زمینه و اهداف: شیگا توکسین (Stx) توسط تولید شده و می تواند سندرم همولیتیک اورمیک ایجاد نماید. Stx تکثیر سلولی را مهار ساخته و باعث آسیب به سلول های اندوتلیال و بیان گیرنده (Globotriaosylceramid (Gb3-cer) در سلول ها می شود. اثر شیگا توکسین بر سلول های اپیتلیال کاملا شناخته نشده است. هدف از این مطالعه بررسی اثر تحریکی شیگا توکسین نوترکیب در بیان سیتوکاین های التهابی در سلول های اپیتلیال و من...
متن کاملکلونینگ و بررسی بیان ژن کد کننده BMP-2 انسانی در باکتری E. coli به منظور تولید یک داروی نوترکیب
Introduction & Objective: Bone morphogenetic proteins are a group of cytokines that belongs to superfamily TGFβ. These proteins play an important role in evolution of many of organs and tissues through germinal period followed by amending and rebuilding of bone tissue and car-tilage. The aim of this study was to clone and expression analysis of BMP-2 gene in E. coli bacteria. Materials & Method...
متن کاملبررسی توانای حفظ و نگهداری سلولهای بنیادی جنینی توسط سلولهای بنیادی مزانشیمی خون بند ناف بعنوان لایه تغذیه کننده
مقدمه: از سلولهای فیبروبلاستی جنینی موش (MEFs) برای حمایت از رشد سلولهای بنیادی جنینی موشی (mESCs) و یا سلولهای بنیادی جنینی انسانی (hESCs) استفاده می شود. تکثیر پیوسته وپی درپی سلولهای mESCبطور معمول توسط هم کشتی این سلولها با MEFبدست می آید. سلولهای MEFبعنوان یک لایه پشتیبان برای سلولهای mESC عمل می کنند. احتمال انتقال رتروویروسها و دیگر پاتوژنها در اثر همجواری سلولهای MEF(که منشاء موشی د...
متن کاملمنابع من
با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید
عنوان ژورنال:
پژوهش های آسیب شناسی زیستیجلد ۱۵، شماره ۱، صفحات ۱-۱۲
کلمات کلیدی
میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com
copyright © 2015-2023